注射hCG当日准备下述培养皿过夜平衡。每制备2个皿即应立即加入矿物油覆盖微滴，避免培养液中的水分蒸发，影响渗透压。培养皿盖应注明实验名称缩写（皿盖侧面也需标注），日期及培养液名。当一个实验的皿超过2个，应在皿盖上注明XX1、XX2等表明顺序。培养皿底部应依次标注胚胎序号。

●取卵当日先杀雄鼠取附睾尾部精子获能。快速颈椎脱臼法处死雄性小鼠（图1）：把小鼠放在鼠笼上面，使它前爪抓住笼子上面的钢丝条，紧紧压住它的颈部，同时水平向后拉伸尾部，使其断颈。

图1快速颈椎脱臼法处死小鼠示意图

●成年小鼠的睾丸大约有一粒黄豆大，在睾丸下方一点与睾丸相连的位置，能看到白色附睾，能看到其内有许多曲精小管（图2）。

图2 雄鼠睾丸结构示意图

●找到睾丸后附睾后，迅速用眼科剪和眼科镊将附睾及输精管剪下置于精子获能滴中，用注射器针头将附睾尾划破，待精子溢出后，培养箱孵育10min，取出体视镜下观察，精子扩散后，放入培养箱继续孵育50min后可用。

图3示意图

●精子获能后立即用M2培养液在培养皿内做数个200ul捡卵滴，矿物油覆盖，置于37℃加热平板上加热30分钟。M2培养液含有HEPES，可以在二氧化碳培养箱外维持pH值稳定，因此只需要加温即可。

●精子获能50分钟后，快速颈椎脱臼法处死雌性供体小鼠。

●将小鼠放在吸水纸上，用75%的乙醇消毒腹部。

●用第一套眼科镊捏住皮肤并用眼科剪在皮肤上做一小切口。然后用力将皮肤拉到头部，完全暴露腹部。然后用第二套器械剪开腹膜，完全暴露内脏器官。将肠管拉向一侧后即可在腹腔中见到两侧的子宫和相连的卵巢。卷曲的输卵管在卵巢和子宫之间（图1）。（注意不能用剪开皮肤的眼科剪和眼科镊去剪腹膜和输卵管，防止出现污染）。

图1 小鼠腹腔解剖示意图

●用眼科镊夹住子宫将其提起，这有利于将子宫和腹膜分离开。用眼科剪在膜上刺破一小口，然后将子宫分离下来。仍用镊子夹住子宫，用显微剪在卵巢和输卵管之间剪开。切口必须尽可能的接近输卵管。将镊子移到输卵管处夹住输卵管，在输卵管和子宫之间在剪一刀（图2）。

图2  输卵管分离示意图

●将输卵管放入M2捡卵滴之间的矿物油中。将有输卵管的皿移至体视镜下，用两个1ml注射器针头配合切开输卵管壶腹部，释放COC，将COC牵引至捡卵滴内（图3）。

图3 捡卵示意图

●用口吸管和灭菌1.5mm毛细玻璃管将COCS转移到HTF清洗皿内，反复吹打，尽量洗去HEPES。

●转移至HTF受精皿内，每个滴放2团COCS。

●用移液枪从精子获能皿中吸取3ul精子加入授精滴内。精子密度1-5×10^6为宜（以放入培养箱中10min后能看到COC被精子打散，精子能推动COC运动即可）。

●整个受精过程以5min内完成为宜（杀鼠到受精入箱）。

●受精6h后，用1.5mm毛细玻璃管拉制的直径100um吸管将受精卵从受精滴中移入KSOM培养皿液滴中，反复吹打，直至透明带上基本无精子残留，移到一个新滴中继续培养4h，观察原核形成情况，以形成原核和排出PB2为受精标志，计算受精率。