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小鼠体内受精原核期胚胎获取

体外受精技术资料 2021-01-14

小鼠体内受精原核期胚胎获取(In Vivo)

6-8周龄雌鼠腹腔(IP)注射10IU PMSG(适宜时间:6-7pm

↓48h later

腹腔注射10IU HCG,立即与雄鼠按11比例合笼交配

次日早晨检查雌鼠是否有阴道栓,有阴栓者表明已成功交配

↓22h post-HCG

将有阴栓的雌鼠颈椎脱臼致死,75%酒精消毒背部,从背部剪下两侧卵巢及输卵管迅速置于预热的HFM液中

在体视镜下用1ml注射器(1号针头)将输卵管刺破,zygote释放出来

用口吸管(移卵管)将zygote置于50ul 0.1Hya 消化去除卵丘细胞,再经HFM液滴洗涤3

在体视显微镜下观察zygote形态,挑选有PB2 2PN的形态正常受精卵置于KSOM培养液,先在平衡(平衡至少4h以上,最好是1天的平衡时间)过的培养液滴中洗涤几次然后再开始体外培养。微滴培养法:10embryo/20ul mediumLaneGardner,1992

观察、记录体外发育情况(2-cell,4-cell,8-cell,morulablastocyst